甘油菌种保藏具体步骤 | 甘油菌种怎么复苏
来源:富路都 本文已影响2.14W人
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1、将无菌操作台灭菌30min,并用75%酒精棉球消毒包括手在内的所有物品。
2、用灭菌接种环扣取试管中的冷冻菌块,然后放入3mlLB液体培养基上,最后在37℃150rpm过夜培养。
3、将过夜菌液重新按照上一个步骤活化一次,一般经2次活化的菌液即可用于实验。这个过程操作一定要快,应提前准备好所有的物品后,再去冰箱取出保种菌。
一、甘油菌种怎么复苏
1、对无菌操作台灭菌30min,然后用75%酒精棉球消毒包括手在内的所有物品。
2、使用灭菌接种环扣取试管中的冷冻菌块放入3mlLB液体培养基上,操作应适当快一些,以减少冻存管内的融化,然后在37℃150rpm过夜培养。
3、将过夜菌液重新按照步骤2活化一次,经过2次活化的菌液即可用于实验。这个过程应准备好所有的东西后,再去冰箱取出保种菌,时间太久会导致保种菌死亡。
二、甘油菌种保藏具体步骤
甘油菌种保藏大多采用-80℃(-70℃)冰箱保藏,具体操作步骤如下:
1、甘油原液太粘稠,应配制合适的甘油水溶液,在无菌操作条件下,分别向已灭菌的2mL冻存管中,加入500uL菌液和500uL50%甘油溶液,充分混匀后,分装至提前灭菌好的保藏管中。
2、将甘油菌放入-80℃(-70℃)冰箱保藏,注意“慢冻快化”,冷冻时降温速率保持1℃/min,保藏时间一般为2-4年左右。有时为了减少菌体因冰晶形成造成的死亡,也会使用液氮速冻之后在放到-80℃冰箱保存。
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